Diabetologia：激活但功能受损的清醒Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现不止来人体内自身免疫到显现不止来1M-乳癌药理学症状的的转型所部在儿童中后期就有很好的描绘，多个人体内自身免疫感染性的儿童中会有70%在肝细胞转换后10年内患病乳癌，而随访15年的儿童这一数目提高到84%。相较之下，占药理学1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的确诊有助于还没有得到充分的研究。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1M-乳癌的的转型：形态在显现不止来多种人体内自身免疫时进入第1以后，显现不止来血糖异常时进入第2以后，显现不止来症状时进入第3以后。一些多发人体内自身免疫感染性的形态，在1期和2期，的转型很更慢，并转型为确诊的1M-乳癌。我们以后描绘了一分组在首次检测到多种人体内自身免疫样本后有数10年无乳癌的极更慢的转型者，这分组病人人数较少，但特质非常明确。随后，我们发现人体内自身肝细胞特异性CD8+T细胞内反应在的转型快速的病人中会前提不存在，但在近期确诊和曾一度存在的乳癌病人中会很非常容易检测到。这不太可能暗示，与的转型病人相较，这些病人自身免疫细胞的平衡增强。

早期研究暗示，尽管平衡性T细胞内(Treg)存量较长时间，但乳癌病人存在一些特性缺陷，其中会包括对IL-2的反应能力也减较少。此外，乳癌病人中会的不稳定性CD4+T细胞内不太可能对平衡更具抵抗性，展现为不稳定性T细胞内的诱发减弱，自然产生的Treg和体外产生的可借Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞内中会IL-2反应减弱。本研究的目的是描绘了CD4+平衡性T细胞内(Treg)在领头极快速的转型者中会的特质，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法有：BOX研究是一项以年轻人为基础的纵向研究，在21岁以下确诊的病人亲属中会检查1M-乳癌的危险因素。我们以后描绘了曾一度快速的转型者的特质，他们保证多重人体内自身免疫感染性将近10年，但没有显现不止来乳癌的药理学症状，更慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保证无乳癌并愿意共享大量血液样本的快速的转型者纳入T和B细胞内特性系统性。在目前的研究中会，8名更慢的转型者(SP分组)，中会位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身免疫感染性。所有的发起者都处于1M-乳癌的转型的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身免疫对某些肝细胞的感染性反应，然而，一名病人从未处于2期有数6年，但没有显现不止来药理学症状，一名病人被诊断为乳癌，该受试者72岁，在野外试验中样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中会对该小分子同步进行了单独危险性评估。裂解外周血单个核分裂细胞内(PBMCs)，采用多常量流式细胞内术和T细胞内诱发试验危险性评估小分子中会Treg的阈值、表M-和特性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类系统性，危险性评估Treg表M-。

结果：与健康小分子相较，来自更慢的转型体的心灵CD4+T细胞内的监督聚类推测，激已逝的心灵CD4+ Treg阈值提高，与持续性可借的TNFR相关蛋白质(GITR)表达不止来提高有关。一名HbA1c升温的病人与的转型快速者和匹配的相比较分组相较，Treg谱大同小异。特性系统性暗示，与健康小分子相较，来自快速的转型体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞内诱发明显破损。展现为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134表达不止来的诱发提高。

左图1 全面性的表M-系统性推测，CD4+Treg甲M-在更慢的转型路由表中会提高。由FlowSOM生成的Treg室，涌进在来自所有小分子的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物表达不止来鉴定不止10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个路由器象征性一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器分组区域内打磨。每个路由器中会的饼左图声称单个标明的表达不止来等级。(b)每个元聚类的热左图，以推测整体标明表达不止来。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成左图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较之下存量级为每个metacluster箱两条路线左图(存量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。蓝色左上方象征性ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模M-证明，Treg阈值的提高是的转型快速的标志。这两项奈斯(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的象征性性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR表达不止来同步进行裂解，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的阈值概要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯有界的箱两条路线左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达不止来强度着色，圆圈突不止的簇被标记为SP和HD路由表之间的并不相同。(j)箱两条路线左图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相较之下存量级(数目)。(k)直方左图推测每个簇的表M-(粉色)和Treg标明相较之下表达不止来与文化背景表达不止来(蓝色);上列，磁盘Treg_3;请注意一行，磁盘Treg_4。文化背景与所有其他簇中会标明的表达不止来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

左图3 与健康献血者相较，的转型快速者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表达不止来标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表达不止来热左图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达不止来串联，推测直方左图(c)和概要左图(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有小分子包括，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表达不止来，从这两项奈斯，从所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，推测直方左图(e)和概要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

左图4 来自快速的转型的CD4+ treg细胞内掌控不稳定性CD4+T细胞内的能力也减较少。SP分组用蓝色的两条路线和左上方声称，HD分组用蓝色的两条路线和左上方声称，蓝色的两条路线/左上方声称小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的数目溶液。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，培养不止来3过后同步进行流式细胞内术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相较之下应的treg培养不止来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养不止来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发比所部(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比所部。用于感染性相比较(激已逝的响应细胞内不含treg)计算诱发比所部。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 不稳定性CD4+T细胞内对快速的转型的T细胞内已逝化的诱发更引人注目。SP分组用蓝色的两条路线和左上方声称，HD分组用蓝色的两条路线和左上方声称，蓝色的两条路线/左上方声称小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按观察的数目溶液。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，培养不止来3过后同步进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养不止来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发前年(b)。(c,d) CD25诱发前年(c)和CD134诱发前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一不止来中会的表达不止来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得不止的正确性是，来自快速的转型子的已逝化心灵CD4+Treg在GITR表达不止来中会得到了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1M-乳癌危险性形态中会的表征的必要性。

不止处不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28